Introducción
Esta práctica consistirá simplemente en la preparación de un medio de cultivo nutritivo o universal, sobre el que posteriormente se realizará la siembra de un frotis bucal.
Con ello, se pretende que el alumnado tenga un primer acercamiento al trabajo en el laboratorio de microbiología, que adquiera destrezas en el laboratorio que les servirán en prácticas posteriores y conseguir una serie de “cultivos madre” que nos servirán en próximas prácticas.
Objetivos
- Introducir al alumnado en los materiales y procedimientos empleados en los laboratorios de microbiología
- Aprender a realizar medios de cultivo.
- Aprender diferentes técnicas de siembra de cultivos bacterianos.
- Poner en práctica la importancia de las técnicas de esterilidad en el laboratorio de microbiología.
Capacidades terminales (CT) y criterios de evaluación (CE)
Esta práctica no se relaciona por sí misma con ninguna CT ni CE del módulo. Sin embargo, veo muy interesante y necesaria su realización para, por un lado, que los alumnos comprendan el funcionamiento de los laboratorios de microbiología. Por otro, servirá de base para realizar prácticas posteriores que permitan la adquisición del CE 2b. (explicar las principales familias de microorganismos que colonizan y parasitan los alimentos de consumo humano, señalando las condiciones higiénicas que evitan su proliferación).
Agrupamientos
- Individual
- Parejas
- Pequeño grupo
Desarrollo de la práctica para la preparación de un medio de cultivo universal. Siembra de un frotis bucal.
La cantidad de medio de cultivo realizado puede adaptarse al tamaño de la clase y la cantidad de placas que se necesiten (las placas estándar suelen llenarse con unos 20 ml de medio de cultivo aproximadamente).
Materiales para la elaboración de un medio de cultivo universal. Siembra de un frotis bucal.
- Papel de filtro por cada puesto de trabajo
- Guantes
- Mechero de alcohol
- Placas de Petri
- Vidrios de reloj para pesar los ingredientes
- Olla o matraz Erlenmeyer
- Balanza de precisión
- Probeta
- Vitrocerámica u otra fuente de calor que nos permita llevar el medio de cultivo a ebullición.
- Agua destilada: 1 litro
- Extracto de levadura: 3 g
- Peptona: 5 g
- Agar-agar: 15 g
- Cloruro de sodio: 8 g
- Hisopo estéril
Elaboración del medio de cultivo
- Pesar en vidrios de reloj las cantidades correspondientes de extracto de levadura, peptona, agar-agar y cloruro de sodio.
- Medir el volumen correspondiente de agua destilada en la probeta
- En una olla o matraz Erlenmeyer, según el equipamiento del taller, mezclar los ingredientes anteriores y “esterilizar” dentro de lo posible el medio de cultivo llevando la mezcla a ebullición.
Nota: yo lo hago así porque para el uso que vamos a darle es suficiente. Además, no disponíamos en el taller de autoclave (de disponer de él, podría hacerse de una forma más eficaz autoclavando el medio de cultivo en botes apropiados).
- Verter en las placas de Petri el medio de cultivo hasta formar una capa fina que cubra toda la superficie, siempre intentando trabajar debajo del mechero para dentro de lo que cabe formar un ambiente estéril.
- Cerrar las placas de Petri y esperar a que la mezcla solidifique.
Siembra e incubación de la muestra
- Frotar el hisopo estéril por la cara internar de las mejillas, encías, paladar etc… para obtener una muestra.
- Trabajando bajo mechero, realizar una siembra en estrías en el medio de cultivo ya solidificado.
- Sellar las placas con parafilm o alguna cinta adhesiva para evitar que se abran.
- Incubar las placas en estufa a 37ºC si queremos un crecimiento en 24 – 48 horas, o a temperatura ambiente si no necesitamos que se produzca en tan poco tiempo.
Una vez producido el crecimiento microbiano, puede hacerse un análisis macroscópico de los diferentes tipos de microorganismos que han aparecido en las placas.
Evaluación
Dado que como hemos dicho, está práctica no se relaciona directamente con ningún CE del módulo, veo interesante que el docente simplemente recabe información, por ejemplo, a través de una lista de cotejo, para valorar el trabajo del alumno en el laboratorio y que sirva a modo de evaluación inicial como punto de referencia para valorar la progresión en el trabajo realizado en prácticas posteriores.
Observaciones
Estos medios nos servirán de base para la realización de las próximas prácticas:
