La tinción de Gram

En este post se desarrollará el protocolo de la tinción de Gram para poder visualizar y clasificar al microscopio diferentes tipos de bacterias, de las cuales podremos observar su morfología, agrupamientos característicos y propiedades de la pared celular (atendiendo al color que adquieran con la tinción).

La tinción de Gram es una tinción diferencial mediante la cual, aplicando un protocolo específico con diferentes colorantes y reactivos, conseguimos teñir de manera diferente las bacterias atendiendo a las características de su pared celular:

• Por un lado, las llamadas bacterias Gram-positivas, que quedarán teñidas de azul.
• Por otro, las Gram-negativas, que quedarán teñidas de rosa.

La clave para conseguir esto radica en las diferencias que estos dos grupos de bacterias presentan en su pared celular: las Gram-positivas presentan una pared celular de mureína o peptidoglucano bastante gruesa, mientras que la de las Gram-negativas es mucho más fina. Al aplicar el protocolo de Gram, las primeras retendrán el primer colorante (azul de metileno) añadido, el cual no podrá salir de las células cuando la muestra se lave con alcohol-acetona (disolvente que se emplea en este protocolo, como veremos a continuación). Por el contrario, las negativas sí que lo perderán, al poder penetrar el disolvente dentro de las células debido a su poco grosor y, posteriormente, quedarán teñidas de rosa al aplicar la safranina a la muestra.

Práctica de laboratorio para la realización de la tinción de Gram

Para el desarrollo de esta práctica utilizaremos las colonias aisladas en los medios de cultivo realizados en la práctica «Preparación de un medio de cultivo nutritivo o universal y siembra de un frotis bucal”. Si no se ha realizado y no tenemos ningún otro cultivo del que tomar la muestra, puede realizarse directamente siguiendo el mismo protocolo tomando una muestra de frotis bucal.

Al igual que ocurre con las bacterias, existen diversos protocolos para la observación de otros tipos de microorganismos al microscopio, como es el caso de los mohos y las levaduras.

¿Qué podemos ver al observar al microscopio una muestra bacteriana teñida mediante la tinción de Gram?

Esta tinción nos permitirá, al ver la muestra en el microscopio óptico, identificar como Gram-positivas aquellas que se hayan teñido de violeta/morado y como Gram-negativas aquellas que se hayan teñido de rosa/fucsia. Así, en caso de en nuestra muestra coexistan ambos grupos bacterianos, tendremos la ocasión de comparar unas y otras, tal y como se muestra en la imagen de la portada.

Además, tendremos la ocasión de distinguir morfologías (cocos, bacilos, espirilos…) y agrupaciones (parejas, cadenas, racimos, tétradas…), en función de los géneros bacterianos presentes en la muestra; si bien esto que podemos conseguir de igual manera con cualquier otro protocolo de tinción para bacterias.

Relaciones curriculares

Ciclo Superior en Dietética, módulo de Microbiología e Higiene Alimentaria

• CT 2. Analizar los distintos sistemas de conservación de alimentos precisando cuál se debe utilizar en función del tipo, grado de elaboración y destino de los mismos.
  • CE B. Explicar las principales familias de microorganismos que colonizan y parasitan los alimentos de consumo humano, señalando las condiciones higiénicas que evitan su proliferación.

Ciclo Superior en Laboratorio Clínico y Biomédico, módulo de Microbiología Clínica

• RA 2. Aplica técnicas de tinción y observación de microorganismos a cultivos y muestras biológicas, seleccionando los procedimientos que hay que realizar.
  • CE a. Se han descrito las características morfológicas, tintóreas y diferenciales de las especies microbianas.
  • CE b. Se han seleccionado los materiales y los colorantes.
  • CE e. Se ha realizado la preparación del frotis.
  • CE f. Se han aplicado técnicas de tinción específicas.
  • CE g. Se ha realizado la observación de los frotis al microscopio.
  • CE h. Se ha interpretado el resultado de la observación microscópica.
• RA 5. Aplica técnicas de identificación bacteriana a muestras clínicas y a colonias aisladas en un cultivo, seleccionando los protocolos de trabajo en función del grupo bacteriano que hay que identificar.
  • CE b. Se han descrito los protocolos de identificación de los principales grupos bacterianos.