La tinción de Gram

Muestra de bacterias teñidas mediante la tinción de Gram
Compartir:

En este post se desarrollará el protocolo de la tinción de Gram para poder visualizar y clasificar al microscopio diferentes tipos de bacterias, de las cuales podremos observar su morfología, agrupamientos característicos y propiedades de la pared celular (atendiendo al color que adquieran con la tinción).

La tinción de Gram es una tinción diferencial mediante la cual, aplicando un protocolo específico con diferentes colorantes y reactivos, conseguimos teñir de manera diferente las bacterias atendiendo a las características de su pared celular:

  • Por un lado, las llamadas bacterias Gram-positivas, que quedarán teñidas de azul.
  • Por otro, las Gram-negativas, que quedarán teñidas de rosa.

La clave para conseguir esto radica en las diferencias que estos dos grupos de bacterias presentan en su pared celular: las Gram-positivas presentan una pared celular de mureína o peptidoglucano bastante gruesa, mientras que la de las Gram-negativas es mucho más fina. Al aplicar el protocolo de Gram, las primeras retendrán el primer colorante (azul de metileno) añadido, el cual no podrá salir de las células cuando la muestra se lave con alcohol-acetona (disolvente que se emplea en este protocolo, como veremos a continuación). Por el contrario, las negativas sí que lo perderán, al poder penetrar el disolvente dentro de las células debido a su poco grosor y, posteriormente, quedarán teñidas de rosa al aplicar la safranina a la muestra.

Práctica de laboratorio para la realización de la tinción de Gram

Para el desarrollo de esta práctica utilizaremos las colonias aisladas en los medios de cultivo realizados en la práctica «Preparación de un medio de cultivo nutritivo o universal y siembra de un frotis bucal”. Si no se ha realizado y no tenemos ningún otro cultivo del que tomar la muestra, puede realizarse directamente siguiendo el mismo protocolo tomando una muestra de frotis bucal.

Materiales para la tinción de Gram

  • Papel de filtro por cada puesto de trabajo
  • Portaobjetos
  • Asas de siembra
  • Reactivos para Gram (azul de metileno, lugol, alcohol-acetona y safranina).
  • Frasco lavador
  • Agua destilada
  • Mechero de alcohol

Protocolo para la tinción de Gram

  • Depositar sobre el portaobjetos una gota de agua destilada.
  • Picar con el asa de siembra en diferentes colonias de la placa, homogeneizar y extender con la gota del portaobjetos.
  • Dejar secar y fijar con calor (pasar el portaobjetos tres veces por la llama del mechero).
  • Cubrir la muestra con azul de metileno y dejar actuar 1 minuto.
  • Enjuagar con agua destilada.
  • Cubrir la muestra con lugol y dejar actuar 1 minuto.
  • Enjuagar con agua destilada.
  • Lavar la muestra con alcohol acetona hasta que el efluente salga incoloro.
  • Cubrir la muestra con safranina y dejar actuar 1 minuto.
  • Enjuagar con agua destilada.
  • Dejar secar la muestra.
  • Observar al microscopio con los objetivos de 10x, 40x y 100x (usando en este último aceite de inmersión).
Ilustración de los cambios que sufre la muestra en el portaobjetos al aplicar en primer lugar el azul de metileno (imagen de la izquierda), decolorar con alcohol-acetona (imagen central) y por último teñir con safranina (imagen de la derecha)

Al igual que ocurre con las bacterias, existen diversos protocolos para la observación de otros tipos de microorganismos al microscopio, como es el caso de los mohos y las levaduras.

¿Qué podemos ver al observar al microscopio una muestra bacteriana teñida mediante la tinción de Gram?

Esta tinción nos permitirá, al ver la muestra en el microscopio óptico, identificar como Gram-positivas aquellas que se hayan teñido de violeta/morado y como Gram-negativas aquellas que se hayan teñido de rosa/fucsia. Así, en caso de en nuestra muestra coexistan ambos grupos bacterianos, tendremos la ocasión de comparar unas y otras, tal y como se muestra en la imagen de la portada.

Además, tendremos la ocasión de distinguir morfologías (cocos, bacilos, espirilos…) y agrupaciones (parejas, cadenas, racimos, tétradas…), en función de los géneros bacterianos presentes en la muestra; si bien esto que podemos conseguir de igual manera con cualquier otro protocolo de tinción para bacterias.

Relaciones curriculares

Ciclo Superior en Dietética, módulo de Microbiología e Higiene Alimentaria

  • CT 2. Analizar los distintos sistemas de conservación de alimentos precisando cuál se debe utilizar en función del tipo, grado de elaboración y destino de los mismos.
    • CE B. Explicar las principales familias de microorganismos que colonizan y parasitan los alimentos de consumo humano, señalando las condiciones higiénicas que evitan su proliferación.

Ciclo Superior en Laboratorio Clínico y Biomédico, módulo de Microbiología Clínica

  • RA 2. Aplica técnicas de tinción y observación de microorganismos a cultivos y muestras biológicas, seleccionando los procedimientos que hay que realizar.
    • CE a. Se han descrito las características morfológicas, tintóreas y diferenciales de las especies microbianas.
    • CE b. Se han seleccionado los materiales y los colorantes.
    • CE e. Se ha realizado la preparación del frotis.
    • CE f. Se han aplicado técnicas de tinción específicas.
    • CE g. Se ha realizado la observación de los frotis al microscopio.
    • CE h. Se ha interpretado el resultado de la observación microscópica.
  • RA 5. Aplica técnicas de identificación bacteriana a muestras clínicas y a colonias aisladas en un cultivo, seleccionando los protocolos de trabajo en función del grupo bacteriano que hay que identificar.
    • CE b. Se han descrito los protocolos de identificación de los principales grupos bacterianos.

Compartir:
QUIZÁS TE INTERESE

2 comentarios en «La tinción de Gram»

  1. I have been browsing online more than 3 hours today, yet I never found any interesting article like yours.

    It is pretty worth enough for me. In my view, if all website owners and bloggers made good content as you did, the
    net will be much more useful than ever before.

    Responder

Deja un comentario

Últimas entradas